Окраска: Гематоксилин-Эозин. Кора надпочечника состоит из тяжей эндокриноцитов

Кора надпочечника состоит из тяжей эндокриноцитов. В клубочковой зоне мозговые эндокриноциты мелкие, образуют тяжи в виде арок. Наиболее выражена пучковая зона. Клетки этой зоны крупные, содержат значительное количество липидов. Тяжи клеток расположены параллельными пучками, направленными к мозговому веществу надпочечника. В сетчатой зоне коры эпителиальные тяжи переплетаются и идут в различных направлениях, образуя сеть. В этой зоне расположены самые мелкие клетки коркового вещества надпочечника. Прослойки соединительной ткани в коре надпочечника незначительны, многочисленные сосуды, расположенные между эндокриноцитами, имеют вид щелей.

В мозговом веществе надпочечника крупные клетки нервной природы (хромаффиноциты) образуют скопления вокруг синусоидных капилляров. В мозговом веществе расположены крупные венозные синусы.

При малом увеличении микроскопа:

а) найти капсулу. Волокна, расположенные по периферии органа оксифильно окрашены (гем.-эоз.) или серо-черного цвета (железный гем.). В капсуле располагаются вегетативные ганглии, скопления адипоцитов, нервы, сосуды.

б) найти кору и границу между корой и мозговым веществом. В корковом веществе видны цепочки клеток (цитоплазмой розового цвета, ядра - синего при окраске гем.-эоз.,

При окраске железным гем. цитоплазма клеток серая, ядра – черные. В мозговом веществе клетки более крупные, расположены диффузно.

в) найти зоны коры. Под капсулой клетки образуют клубочки; в пучковой зоне – видны тяжи клеток радиально направленных параллельными пучками к мозговому веществу; в сетчатой зоне тяжи клеток переплетаются, образуя сеть.

г) рассмотреть хромаффиноциты мозгового вещества. Эти крупные эндокриноциты расположены рыхлыми скоплениями вокруг синусоидных капилляров.

д) найти венозный синус. В центре мозгового вещества расположена крупная полость – мозговой венозный синус.

Зарисовать препарат и обозначить на рисунке:

1. капсулу

2. корковое вещество

3. корковые эндокриноциты

4. клубочковую зону

5. пучковую зону

6. синусоидные капилляры

7. сетчатую зону

8. мозговое вещество

9. хромаффиноциты

10. венозный синус

Фото. 2.3.1. Надпочечник. Железный гем.

Малое увеличение. (Ув.10х7)

Фото. 2.3.2. Надпочечник. Гем.-Эоз.

Малое увеличение. (Ув.10х7)

Фото. 2.3.3. Клубочковая зона коры надпочечника. Гем.-Эоз.

Большое увеличение. (Ув.40х7)

Фото. 2.3.4. Пучковая зона коры надпочечника. Железный гем.

Большое увеличение. (Ув.20х7)

Фото. 2.3.5. Сетчатая зона коры и мозговое вещество надпочечника. Железный гем.

Окраска гематоксилин-эозин (окраска гематоксилином и эозином) является одним из самых распространённых методов гистологии. Широко используется в медицинской диагностики, в частности в онкологии для окраски ткани, полученной при биопсии.

Окраска включает использование основного красителя гематоксилина, окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина Y, окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. Эозинофильные структуры содержат внутри — и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.

Таким образом, терминология базофильная и эозинофильная структура связана с аффинностью к соответствующим красителям и не связана с кислотностью среды.

Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило гидрофобные) и требуют иных методов окраски. Например, участки клеток, богатые липидами и миелином остаются неокрашенными: адипоциты, миелиновая оболочка аксонов нейронов, мембрана аппарата Гольджи и др.

Wikimedia Foundation. 2010 .

Смотреть что такое «Окраска гематоксилин-эозин» в других словарях:

Гематоксилин - Общие Систематическое наименование цис (+) 7,​11b ​дигидробенз[b]индено​​пиран ​3,​4,​6a,​9,​10(6H) ​пентол Химическ … Википедия

Эозин Y - Общие Систематическое наименование 2 (2,4,5,7 тетрабромо 6 оксидо 3 окс … Википедия

ОКРАСКА - (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия

ВОСПАЛЕНИЕ - ВОСПАЛЕНИЕ. Содержание: Морфология и патологич. физиология В. . .626 Экспериментальное изучение В. 631 Причины В. 632 Характер В. 63 3 Сравнительная патология В. 636 Механизм развития… … Большая медицинская энциклопедия

Кожа - У этого термина существуют и другие значения, см. Кожа (значения). О коже как материале см. Кожевенное производство, Кожаные изделия, Художественная обработка кожи. Кожа наружный покров организма позвоночных, защищающий тело от широкого… … Википедия

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

КРАСКИ - КРАСКИ, химич. вещества, обладающие свойством окрашивать другие предметы в свой или другой цвет непосредственно или с помощью другого хим. соединения протравы. Широкое применение К., надо полагать, вызывается инстинктивным стремле нием человека к … Большая медицинская энциклопедия

Окрашивание гематоксилином-эозином

Универсальный русско-английский словарь. Академик. ру. 2011 .

Смотреть что такое «окрашивание гематоксилином-эозином» в других словарях:

Окраска гематоксилином и эозином - Гистологический образец лёгочной ткани человека, окрашенный гематоксилин эозином. Окраска гематоксилином и эозином (окраска гематоксилин эозином) один из самых распространённых методов окраски в гистологии. Широко используется в м … Википедия

Краситель Романовского - сочетает в своем составе эозинат (химически восстановленный эозин) и метиленовый синий, иногда с продуктами окисления последнего азуром А и азуром Б. Краситель Романовского является прототипом ряда других красителей, которые применяют для… … Википедия

Методические подходы и методы исследования в анатомии человека - Иногда приходится слышать о том, что в анатомии уже ничего не осталось для изучения, исследования, якобы все темы исчерпаны, все, что можно было изучать, уже изучено, все вопросы решены. Как будто бы все, что касается строения тела человека,… … Словарь терминов и понятий по анатомии человека

Краситель Романовского - Райта - Краситель Романовского сочетает в своем составе эозинат (химически восстановленный эозина) и метиленовый синий, иногда с продуктами окисления последнего азуром А и азуром Б. Краситель Романовского является прототипом ряда других красителей,… … Википедия

Гистология - (от греч. ἱστός ткань и греч. λόγος знание, слово, наука) раздел биологии, изучающий строение тканей живых организмов. Обычно это делается рассечением тканей на тонкие слои и с помощью микротома. В отличие от анатомии,… … Википедия

КРОВЬ - КРОВЬ, жидкость, заполняющая артерии, вены и капиляры организма и состоящая из прозрачной бледножелтоват. цвета плаз мы и взвешенных в ней форменных элементов: красных кровяных телец, или эритроцитов, белых, или лейкоцитов, и кровяных бляшек, или … Большая медицинская энциклопедия

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА - ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА. Содержание: Методика гистологич. исследований. 242 Теоретические основы Г. т. 246 Гистохимия. 253 Краски, употребляемые в Г. т. 258 Гистологическая техник а техника изучения… … Большая медицинская энциклопедия

ПЕЧЕНЬ - ПЕЧЕНЬ. Содержание: I. Аштомия печени. 526 II. Гистология печени. 542 III. Нормальная физиология печени. 548 IV. Патологическая физиология печени. 554 V. Патологическая анатомия печени. 565 VІ.… … Большая медицинская энциклопедия

Базофилия - Эту статью следует викифицировать. Пожалуйста, оформите её согласно правилам оформления статей. Базофилия (от др. греч … Википедия

Спермограмма - (от др. греч. σπέρμα семя и γράμμα запись) анализ эякулята (спермы), используемый в медицине для установления фертильности мужчины и выявления возможных заболеваний половой системы. Спермограмму назначают при жалобах супружеской … Википедия

Патологическая анатомия твёрдых тканей зуба - Патологические процессы в твёрдых тканях зуба традиционно подразделяются на две группы кариес и некариозные поражения. Содержание 1 Кариес (caries) 1.1 Этимология термина «кариес» … Википедия

Источники:

//dic. academic. ru/dic. nsf/ruwiki/666219

//universal_ru_en. academic. ru/1793413/%D0%BE%D0%BA%D1%80%D0%B0%D1%88%D0%B8%D0%B2%D0%B0%D0%BD%D0%B8%D0%B5_%D0%B3%D0%B5%D0%BC%D0%B0%D1%82%D0%BE%D0%BA%D1%81%D0%B8%D0%BB%D0%B8%D0%BD%D0%BE%D0%BC-%D1%8D%D0%BE%D0%B7%D0%B8%D0%BD%D0%BE%D0%BC

Широкое применение гематоксилина в микроскопической технике обусловлено его замечательными свойствами как красителя растительного происхождения. Уникальность происхождения и отличительные природные свойства позволяют говорить о незаменимости свойств этого продукта в научных исследованиях и лабораторной диагностике.


Гематоксилин - краситель растительного происхождения, который содержится вформе гликозида в соке кампешевого дерева (Haematoxylon campechianum), произрастающего в Индии и Америке. Родиной же этого дерева является Южная Мексика, область Кампече.Кампешевый экстракт, содержащий гематоксилин, изначально применялся для окраски тканей в текстильной промышленности. В качестве гистологического красителя гематоксилин стал применяться с середины XIX века. Гематоксилин, введенный в микротехнику Вальдейером в 1882 году, положил начало разработке ценнейших методов окраски. Первый рецепт квасцового гематоксилина был предложен Бемером в 1865 году. И в XX веке стал главным красителем, применяемым для окраски ядер клеток.

Химические свойства гематоксилина

Гематоксилин представляет собой бесцветные или слабо окрашенные кристаллы сладкого вкуса, приобретающие под действием света, а также на воздухе красновато-желтую окраску. Гематоксилин малорастворим в холодной воде, но растворим в воде горячей (особенно в присутствии буры), этиловом спирте, глицерине, плохо растворим в диэтиловом эфире. Со щелочами дает растворы пурпурного цвета, который быстро переходит в синевато-фиолетовый, а затем в коричневый. Разбавленные кислоты на гематоксилин не действуют. Обладает свойствами кислотно-основного индикатора. Брутто-формула гематоксилинаС16Н14О6 CAS 517-28-2, а наиболее часто встречающиеся синонимы: Haematoxylin, Hematoxylin, Natural Black 1, C .I. 75290, гидроксибразилин, оксибразилин.

Применение

Сам по себе гематоксилин не представляет пигмента, но при окислении гематоксилина чрезвычайно легко образует пигмент гематеин, который в свою очередь дает различные продукты более глубокого окисления, неприменимые для окрашивания. Все рецепты приготовления гематоксилина для окрашивания препаратов имеют своей целью превращение гематоксилина в гематеин. Но ни гематоксилин, ни гематеин не способны давать окрашивание без протрав, с которыми они образуют солеобразные соединения - лаки. В качестве протрав используют соли алюминия, железа, меди, хрома, молибдена, ванадия. Самыми распространенными протравами являются соединения алюминия (в виде алюмоаммонийных или алюмокалиевых квасцов) или железа (хлорид железа или железоаммонийный квасцы). Другие протравы используются гораздо реже и включают хромовые квасцы и фосфорновольфрамовую кислоту.

Гематоксилин Гематеин

Растворы гематоксилина

Существуют многочисленные способы приготовления красящих растворов из гематоксилина, хотя суть всех этих методов заключается в одном - его окислении.

Методы с железным гематоксилином

Существуют два метода окрашивания железным гематоксилином - регрессивный и прогрессивный. Первый основан на избыточном окрашивании и последующей дифференцировке путем отмывания в соответствующей жидкости; при этом соли железа вводят в раствор красителя либо обрабатывают ими срезы перед окрашиванием. Жидкость, служащая для дифференцировки, после окончания процедуры должна быть тщательно отмыта. Если она не отмыта, то продолжает действовать после достижения желательной степени дифференцировки и может испортить окраску.

В прогрессивном методе используют кислые растворы или избыток солей железа, что позволяет избежать переокрашивания.

К методам окрашивания с железным гематоксилином обычно относят:

· Железный гематоксилин Брусси.

· Железный гематоксилин Вейгерта.

· Железный гематоксилин по Ясвоину.

· Железный гематоксилин по Рего.

· Железный триоксигематеин по Ганзену.

· Окраска хлористожелезным гематоксилином по Геквисту.

Методы с квасцовыми гематоксилинами

Комплексы гематоксилина с солями алюминия обычно готовят, используя двойной сульфат аммония и алюминия или алюмо-аммониевые квасцы. Такие комплексы обычно называются квасцовым гематоксилином. Иногда вместо аммониевых используются калиевые или натриевые квасцы, причем результаты окрашивания не изменяются. Так как красящим началом является гематеин, а соли алюминия в отличие от солей трехвалентного железа не являются окислителями, растворы квасцового гематоксилина перед использованием необходимо окислить или дать им “вызреть”. Гематеин медленно образуется при пропускании пузырьков воздуха через растворы гематоксилина (для получения однородных результатов может понадобиться 3-4 недели), при выдерживании растворов в открытых сосудах в течение нескольких недель; гематеин образуется также в твердом красителе, хранящемся в открытом сосуде во влажной атмосфере. Большинство химических окислителей, таких, как перекиси, иодаты, перманганаты, перхлораты, окись ртути и соли трехвалентного железа, окисляют гематоксилин сразу, хотя некоторые из них действуют при нагревании.

Избирательность окраски ядер квасцовым гематоксилином возрастает в присутствии избытка солей алюминия или еще в кислых растворах.

К методам окрашивания с квасцовыми гематоксилинами обычно относят:

· Кислый гемалаун Майера.

· Двойная окраска гемалаун-эозином.

· Квасцовый гематоксилин но Эрлиху.

· Окраска гематоксилином Делафильда.

· Окраска квасцовым гематоксилином по Ганзену.

· Квасцовый гематоксилин по Карацци.

Также широкое распространение получили следующие методы:

· Методика окраски срезов с дифференцировкой

· Методика окраски гематоксилин-эозином на предметном стекле.

· Методика проведения окраски парафиновых срезов гематоксилин-эозином по методу Бемера.

· Методика окраски гематоксилин-эозином

Более подробно о вышеперечисленных методах можно прочитать .

Неоднократно предпринимались попытки отыскать более дешевую и удобную замену гематоксилину для применения в микроскопической технике. Предлагали использовать такие природные красители, как сок черники, черной смородины, синтетические красители (антоциан ВВ, феноцианин ТС, галлеин, бразилин, ализариновый синий S, целестиновый синий). Однако ни один из данных заменителей в настоящее время не смог полностью заменить гематоксилин. Во многом поэтому, на сегодняшний день, гематоксилин незаменим в научных исследованиях и лабораторной диагностике.

По материалам статьи Горбуновой Т.К.

«Электронный математический и медико-биологический журнал» . - Т. 7. - Вып. 1. - 2008.

Эта окраска является двойной: гематоксилин - основной краситель - окрашивает ядра клеток, эозин - кислый краситель - красит протоплазму клеток и в меньшей степени - различные неклеточные структуры.

Окраска включает использование основного красителя гематоксилина , окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителяэозина Y , окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержатнуклеиновые кислоты (ДНК иРНК ):клеточное ядро ,рибосомы и РНК-богатые участкицитоплазмы . Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточныебелки , например,тельца Леви . Цитоплазма является эозинофильной средой.Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.

2. Окраска железным гематоксилином

Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах (парафиновых, криостатных, вибрoтомных, изготовленных на заморажи-вающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент не содержит этанола и метанола. Предназначен для использования в качестве ядерного красителя при окраске соединительной ткани по Ван-Гизону, Маллори, Массону и в других многоцветных методах окраски гистологических препаратов. Достоинствами предлагаемого гематоксилина являются отличное и интенсивное окрашивание ядер клеток в срезах, устойчивость окраски к пикриновой Кислоте и другим слабым кислотам, отсутствие тенденции к перекраске препарата(при соблюдении рекомендаций) и необходимости дифференцировки окраски.

3. Окраска метиленовым синим Лефлера Методика окраски. Смешивают 30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего со 100 мл 0,01 % раствора гидроксида калия. Мазки окрашивают в течение 3 - 5 мин, ополаскивают в проточной воде, дифференцируют 3 сек в 0,5 % растворе уксусной кислоты и ополаскивают в проточной воде. Проводят через спирты, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам. Препараты можно изучать при масляной иммерсии без заключения в бальзам, но в этом случае они хранятся недолго. Результат: бактерии окрашиваются в густо-синий цвет.

Органический основной тиазиновый краситель , применяют для окраскихлопка ,шерсти ,шелка в ярко-голубой цвет, однако окраска слабоустойчива на свету. Ваналитической химии применяется для определенияхлоратов ,перхлоратов ,катионов ртути ,олова ,магния ,кальция ,кобальта ,кадмия .

В медицине используется в качествеантисептика ,антидот при отравлениицианидами ,угарным газом исероводородом . Имеются сообщения о высокой эффективности этого соединения при леченииболезни Альцгеймера .

4. Окраска пикрофуксином

При окраске пикрофуксином набухшие коллагеновые пучки ярко-красного цвета, гомогенные с плохо различимым волокнистым строением. В очагах более резкого поражения коллагеновые пучки неравномерной окраски, местами они ярко-красные, местами с пятнами желтого цвета, местами коричневые. 5. Окраска по Романовскому-Гимзе Приготовление красителя Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 - 25 минут при 370 C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии. Красящую смесь Романовского-Гимзы в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде. Методика окраски 1. Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40-120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга - 5,8 - 6,0, для мазка крови - 6,4 - 6,5, для выявления простейших - 6,8, малярийного плазмодия - 7,0 - 7,2. 2. Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии. Результат: бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток - в голубой, ядра - в красный.

6. Окрашивание конго-красным

Внешний вид - красно-коричневые кристаллы. плохо растворим в холодной воде. В органических растворителях не растворяется.Данный краситель находит применение в микроскопических исследованиях и используется, в виде спиртового, водного или аммиачного раствора для окрашивания клеточной оболочкигрибов (самостоятельно, либо в сочетании сгенциановым фиолетовым ) . Конго красный широко применяется в гистологии для выявления амилоида . Помимо этого "классического" применения, конго красный используется в десятках других процедур окрашивания в зоологии беспозвоночных, ботанических исследованиях, цитологии человека и животных .

Методика контрастирования (окраски) парафиновых срезов Гематоксилином и эозином (г.-э)

1) Парафиновые срезы, наклеенные на предметные стёкла, освобождают от парафина (депарафинизируют) поочерёдно погружая их в 2 Порции ксилола (толуола, бензола) – По 3 мин.

2) Производят гидратацию срезов путём поэтапного помещения их в спирты убывающей концентрации (96º, 80º, 60º, 40º, а затем в дистиллированную воду На 3-4 мин .

3) Окрашивают срезы сначала раствором ядерного (основного) красителя - гематоксилина В течение 2 мин.

4) После этого срезы переносят в водопроводную воду, которая имеет щелочную среду, для окисления гематоксилина. При этом он приобретает синий цвет, а затеи всполаскивают в дистиллированной воде.

5) Окрашивают срезы раствором цитоплазменного (кислого) красителя - Эозина – в течение 0,5-1 мин.

6) Избыток красителя смывают дистиллированной водой в течение 1 мин.

7) Окрашенные срезы обезвоживают. Для этого их помещают в Спирты возрастающей концентрации – поочерёдно в спирты 40º, 60º, 80º, 96º, и 100º – По 1-2 мин.

8) Обезвоженные срезы просветляют в карбол-ксилоле, а затем - в двух порциях ксилола – по 2 мин .

9) Заключение срезов: на срез стеклянной палочкой наносят маленькую каплю раствора канадского бальзама (полистирола, дамар-лака и др.) и накрывают обезжиренным покровным стеклом, осторожно опуская его под углом, стремясь избежать попадания пузырьков воздуха. Сверху можно поместить небольшой грузик для удаления избытка бальзама (полистирола).

Оценка результатов окрашивания

Гематоксилин является щелочным (основным) красителем. Он окрашивает структуры клеток и тканей, имеющие кислую среду, например, ДНК и РНК в ядрах клеток, кислые гликозаминогликаны в межклеточном веществе соединительной ткани. Поэтому такие структуры называются Базофильными (от лат. Basis – основание). В окрашенном гематоксилином микропрепарате ядра клеток будут тёмно-синими или тёмно-фиолетовыми.

Эозин (от греч. заря) имеет красный или розовый цвет и является кислым красителем. Поэтому окрашивающиеся им щелочные компоненты клеток или неклеточных структур называются Оксифильными, Или ацидофильными (от греч. Oxy Или лат. Acidum – кислота), Или эозинофильными .

Следует учесть, что цитоплазма разных клеток может окрашиваться как базофильно, так и эозинофильно. Например, клетки, активно синтезирующие белковые компоненты, содержат в цитоплазме большое количество рибосом (а, следовательно, и РНК), поэтому их цитоплазма окрашивается Базофильно . Если структуры цитоплазмы окрашиваются одновременно и основными, и кислыми красителями, то они называются Нейтрофильными , или Гетерофильными .

Есть целый ряд красителей, например тиазинового ряда (азур, толуидиновый синий, метиленовый синий и др.), которые при взаимодействии с компонентами клеток и тканей изменяют свой цвет на им несвойственный (синий на красный или фиолетовый; чёрный на жёлтый или зелёный и т. д.). Такое явление получило название Метахромазия.

При соблюдении правил приготовления микропрепаратов и применении стойких красителей постоянные микропрепараты Могут сохраняться десятилетиями, не утрачивая своих первоначальных качеств.

Следует помнить , что ядерные и цитоплазменные красители обычно связываются с окрашиваемыми структурами в количествах, пропорциональных содержанию в них реагирующих компонентов. На этом основана Количественная цито - И гистохимия.