В клинической практике обычно определяют количество эритроцитов и лейкоцитов, а иногда и тромбоцитов.
Определение количества эритроцитов
Подсчет количества эритроцитов производят в счетной камере с сеткой Горяева (камера Горяева). Кровь набирают в смеситель (меланжер) до метки "0,5", а затем до метки "101" насасывают жидкость-разбавитель, при этом кровь разбавляют в 200 раз. В качестве разбавителя применяют 0,9% -ный или 3% -ный раствор поваренной соли, жидкость Гайема (сулема - 0,5 г, хлористый натрий - 1 г, сернокислый натрий - 5 г, дистиллированная вода - 200 мл) или раствор йода (йод кристаллический - 0,3 г, йодистый калий - 0,4 г, лимоннокислый натрий - 2 г, дистиллированная вода - 100 мл).
Кровь с разбавителем тщательно перемешивают 2-3 минуты, удаляют 2-3 капли из капилляра меланжера, а следующую каплю наносят под заранее притертое покровное стекло на сетку камеры - Заряженную камеру закрепляют на предметном столике микроскопа и выжидают 2-3 минуты, чтобы эритроциты осели на дно. Для обнаружения сетки камеры пользуются объективом 8, а при подсчете эритроцитов применяют объектив 40. Подсчет начинают с левого большого квадрата (разделенного на 16 маленьких квадратиков), а затем подсчитывают эритроциты еще в 4 больших квадратах, расположенных по диагонали сетки камеры.
Количество эритроцитов в 1 мм3 крови определяют по формуле:
X= (A*B) / (B* (1/4000))
где: х - искомое количество эритроцитов в 1 мм 3 крови, а - сумма эритроцитов, подсчитанных в 5 больших квадратах, б - степень разведения крови, в - количество маленьких квадратиков в 5 больших квадратах, 4000 объем разбавленной крови над одним маленьким квадратиком сетки камеры (в мм 3). При разведении крови (1: 200) и подсчете эритроцитов в 5 больших квадратах формула значительно упрощается и будет выглядеть так:
х = а * 10 000.
Эритропения, или олигоцитемия - уменьшение количества эритроцитов - характерна для первичных и вторичных анемий. Сопоставление числа эритроцитов с количеством гемоглобина позволяет делать важные дифференциально-диагностические заключения.
Эритроцитоз, или нолицитемия - увеличение числа эритроцитов - встречается при сгущении крови вследствие потери организмом воды при обильном потоотделении, поносах, во время образования экссудатов и транссудатов, в начальной стадии инфекционных и лихорадочных процессов, при непроходимости тонкого отдела кишечника.
Здоровых животных приведено в табл. 38.
Лейкоцитоз, или гиперлейкоцитоз - повышение количества лейкоцитов - встречается очень часто. Лейкоцитоз может быть:
- 1. физиологическим - при беременности, у новорожденных, после сильной физической нагрузки и т.д.;
- 2. медикаментозным - после введения белковых препаратов, алкалоидов, жаропонижающих средств и т.д.;
- 3. патологическим - при инфекционных болезнях, воспалительных процессах, интоксикациях и др.
Для подсчёта форменных элементов взятую из пальца кровь разбавляют в специальных смесителях, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчёта. Разбавленной кровью заполняют специальную счётную камеру и подсчитывают под микроскопом число форменных элементов. Зная объём камеры и разбавление крови, вычисляют число кровяных телец в 1 мкл цельной крови.
Для подсчёта форменных элементов используют счётную камеру Горяева. Она представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого находятся четыре желобка с тремя узкими площадками между ними. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от этого желобка расположены сетки, нанесённые на стекло. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из них дополнительно расчерчены на 16 маленьких. Единицей отсчёта является маленький квадрат. Его сторона равна 1/20 мм, площадь - 1/20 х 1/20 = 1/400 мм 2 . Объём разведённой крови, помещающийся над маленьким квадратом, равен 1/400 мм 2 х 1/10 мм =1/4000 мм 3 . Перед работой необходимо рассмотреть под микроскопом сетку.
Для разбавления крови используют меланжеры или смесители. Смеситель представляет собой капилляр с расширением в средней части. В расширенном участке находится стеклянная бусинка для перемешивания разведённой крови. На капиллярах нанесена градуировка - метки 0,5 и 1,0. Третья метка находится в смесителе: для подсчёта эритроцитов - 101, лейкоцитов - 11. Для забора крови на меланжер надевают резиновую грушу, сдавливанием и расправлением которой достигается насасывание в него и крови и разбавляющих растворов. Для подсчёта эритроцитов в меланжер набирают кровь до метки 0,5 и раствор до метки 101, при этом кровь разбавляется в 200 раз. В меланжер для подсчёта лейкоцитов набирают кровь до метки 1, а раствор - до 11, при этом кровь разбавляется в 10 раз.
При подсчёте эритроцитов в качестве разбавляющего раствора применяют 3% раствор NaCl. Эритроциты в нём сморщиваются и становятся заметнее. При подсчёте лейкоцитов кровь разбавляют 5% раствором уксусной кислоты. В этих условиях эритроциты разрушаются и в поле зрения остаются только лейкоциты (точнее, их ядра). Уксусную кислоту подкрашивают метиленовым синим, при этом ядра лейкоцитов становятся видны отчетливее.
В норме в 1 мкл крови человека содержится в среднем 4,5 - 5 млн эритроцитов (или 4,5 - 5 в 1л).
Камеру помещают под микроскоп и рассматривают сетку вначале при малом, а затем при большом увеличении.
Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец.
Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для эритроцитов, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтрованной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с раствором NaCI, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 101 (т.е. разводят кровь в 200 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.
Для подсчёта эритроцитов берут заполненный смеситель, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя третьим и первым пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля сама втягивается в покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчёту. Считать эритроциты лучше при малом увеличении (объективе х 8), но использовать при этом окуляр х 15.
Для того чтобы получить наиболее точные данные, необходимо подсчитать число эритроцитов в пяти больших квадратах, расположенных в различных местах сетки, например, по диагонали. Подсчёт ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчёта клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют следующее правило «К данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся».
Подсчитав, таким образом, сумму эритроцитов в пяти больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объём пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм 3 , умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мм 3 разведённой крови. Умножив на величину разведения (200), получают количество эритроцитов в 1 мм 3 цельной крови.
Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:
Х = (Э ·4000 · 200) /80, где
Х - искомое число эритроцитов в 1 мм 3 (мкл) цельной крови, Э - сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратах.
В итоге полученное число эритроцитов записывают в пересчёте на 1 л крови, т. е. число миллионов эритроцитов, найденных в 1 мм 3 (мкл) умножают на 10 12 .
У человека и многих млекопитающих животных красные кровяные клетки, или эритроциты, представляют собой безъядерные клетки двояковогнутой формы (цвет. табл. II). Они эластичны, что помогает им проходить по узким капиллярам. Диаметр эритроцита человека 7-8 мкм, а толщина - 2-2,5 мкм. Отсутствие ядра и форма двояковогнутой линзы (поверхность двояковогнутой линзы в 1,6 раза больше поверхности шара) увеличивают поверхность эритроцитов, а также обеспечивают быструю и равномерную диффузию кислорода внутрь эритроцита.
Общая поверхность всех эритроцитов человека более 3000 м 2 , что в 1500 раз превышает поверхность его тела.
Общее количество эритроцитов, находящихся в крови человека, огромно. Оно примерно в 10 000 раз больше населения нашей планеты. Если выстроить все эритроциты человека в один ряд, то получилась бы цепочка длиной около 180 000 км; если же положить эритроциты один на другой, то образовалась бы колонна высотой, превосходящей длину экватора земного шара (50 000- 60 000 км).
В 1 мм 3 крови содержится от 4 000 000 до 5 000 000 эритроцитов (у женщин 4 000 000-4 500 000, у мужчин 4 500 000 - 5 000 000).
Количество эритроцитов не строго постоянно. Оно может значительно увеличиваться при недостатке кислорода на больших высотах, при мышечной работе. У людей, живущих в высокогорных районах, эритроцитов примерно на 30% больше, чем у жителей морского побережья. Не случайно, в первые дни пребывания в горной местности человек испытывает слабость, головокружение, снижается его работоспособность. Эти явления связаны с недостаточным поступлением в организм кислорода в условиях разреженного воздуха. Однако через некоторое время состояние человека значительно улучшается, так как в организме увеличивается количество эритроцитов, а следовательно, улучшается обеспечение его кислородом. При переезде из низменных районов в высокогорные количество эритроцитов в крови увеличивается. Когда же потребность в кислороде уменьшается, количество эритроцитов в крови снижается.
Подсчет эритроцитов
Подсчет эритроцитов производится при помощи специальных счетных камер.
Для подсчета форменных элементов взятую из пальца кровь разбавляют в специальных смесителях, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для счета. Для разбавления крови при подсчете эритроцитов применяют гипертонический (3-про-центный) раствор NaCl, в котором эритроциты сморщиваются.
Смеситель (меланжер) состоит из градуированной капиллярной трубочки с яйцевидным расширением (ампулой). В ампулу помещена стеклянная бусинка для лучшего размешивания крови (рис. 5). Имеются смесители для подсчета красных и белых кровяных телец. В смесителях для эритроцитов бусинка внутри ампулы окрашена в красный цвет, а для лейкоцитов - в белый. На капилляре смесителей имеются метки 0,5 и 1,0; они обозначают половину или целый объем капилляра. Выше яйцевидного расширения метка 101 в смесителе для эритроцитов означает, что полость расширения (ампулы) имеет объем в 100 раз больший, чем объем полости капилляра. На смесителе для лейкоцитов имеется метка И, свидетельствующая о том, что полость ампулы в 10 раз больше полного объема капилляра. Когда в смеситель для эритроцитов набирают кровь до метки 1,0, а затем разбавляют ее 3-процентным раствором NaCl, доводя общий объем до метки 101, кровь будет разведена в 100 раз. При разведении в 200 раз следует набрать кровь в капилляр смесителя до метки 0,5 и добавить разбавляющей жидкости до метки 101.
Перед употреблением смеситель должен быть тщательно вымыт, высушен продуванием воздуха с помощью водоструйного насоса или резиновой груши. Достаточно ли просушен смеситель, определяют по передвижению бусинки в ампуле: прилипание бусинки к стенкам свидетельствует о наличии влаги.
Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло, на верхней поверхности которого имеются три поперечные площадки, разделенные между собой углублениями (рис. 6). Средняя площадка ниже крайних на 0,1 мм, и при наложении на боковые площадки покровного стекла над сеткой средней площадки образуется камера глубиной 0,1 мм. Камера Горяева имеет на средней площадке поперечный желобок. По обе стороны от этого желобка находится квадратная сетка, нарезанная специальной делительной машиной. Сетка может иметь разный рисунок в зависимости от конструкции камеры. В сетке камеры Горяева имеется 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 маленьких квадратиков каждый. Размеры маленьких квадратиков в камере любой конструкции одинаковы. Сторона малого квадрата равна 1⁄20 мм, следовательно, его площадь 1⁄20 × 1⁄20 = 1⁄400 (мм 2). Если учесть, что высота камеры (расстояние от поверхности средней площадки до покровного стекла) равна 1⁄10 мм, то объем крови над малым квадратом равен: 1⁄400×1⁄10 = 1⁄4000 (мм 3).
Опыт 6
Налейте в чашечку раствор для разбавления крови (3-процентный раствор NaCl). Проколите иглой кожу пальца, первую выступившую из пальца каплю крови сотрите ватным тампоном и, когда на пальце появится капля крови достаточной величины, погрузите в нее кончик смесителя. Наконечник смесителя (4 на рис. 5) возьмите в рот и насосите кровь до метки 0,5, Надо следить, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Для этого кончик капилляра должен быть погружен в каплю крови до конца насасывания. Нельзя прижимать смеситель к пальцу, чтобы не закупорить отверстие смесителя. Нужно стараться, чтобы кровь не поднималась выше указанной метки на смесителе, но если это случилось, то можно осторожно опустить кончик капилляра на вату или фильтровальную бумагу, и уровень крови опустится. Разумеется, ошибка при подсчете увеличится. Затем быстро погрузите кончик капилляра в разбавляющую жидкость (3-процентный раствор NaCl). He выпуская кровь из смесителя, насосите в него ртом разбавляющий раствор до метки 101. Кровь теперь будет разведена в 200 раз. Закончив набор жидкости, переведите смеситель в горизонтальное положение, снимите резиновую трубку, закройте капилляр с обоих концов большим и указательным пальцами и тщательно перемешайте жидкости в расширении смесителя. Теперь смеситель в горизонтальном положении опустите на стол.
Плотно притрите покровное стекло к крайним площадкам счетной камеры так, чтобы при опрокидывании камеры стекло не падало. Из смесителя выпустите 2-3 капли жидкости на вату или фильтровальную бумагу, а следующую каплю с кончика капилляра выпустите под покровное стекло в счетную камеру. Смесь жидкостей в силу капиллярности должна ее равномерно заполнить, а положение покровного стекла не должно измениться. Если стекло "всплывает", то камеру тщательно протрите и процедуру заполнения повторите. Заполненную камеру поместите под микроскоп.
При малом увеличении подсчитайте число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках, что соответствует 5 большим часто разграфленным квадратам. 5 больших квадратов выбирайте по диагонали через всю счетную камеру. Это делается для того, чтобы уменьшить ошибку, связанную с неравномерностью заполнения камеры.
Чтобы облегчить подсчет эритроцитов, на листе бумаги нарисуйте 5 больших квадратов, каждый из них разделите на 16 маленьких квадратиков. Подсчитав под микроскопом число эритроцитов в каждом маленьком квадратике, впишите эту величину в квадратики на бумаге.
Для того чтобы не ошибиться в подсчете и дважды не подсчитать эритроциты, лежащие на границах между малыми квадратиками, пользуйтесь таким правилом: относящимися к данному квадрату считаются эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе квадрата, не считаются.
Исходным для дальнейших расчетов принимают объем жидкости над одним малым квадратиком. Поскольку он равен 1⁄4000 мм 3 , то количество эритроцитов в 1 мм 3 крови можно подсчитать, умножив среднее количество эритроцитов в малом квадратике на 4000 и на величину разведения крови.
где Э - число эритроцитов в 1 мм 3 крови;
n - число эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратиках;
200 - разведение крови.
Закончив подсчет эритроцитов, вымойте счетную камеру и вытрите ее насухо чистой марлей.
Значение эритроцитов в поддержании постоянства внутренней среды
Основная функция эритроцитов заключается в переносе кислорода от легких ко всем клеткам тела. Находящийся в эритроцитах гемоглобин легко соединяется с кислородом и легко отдает его в определенных условиях.
Велика роль эритроцитов и в удалении углекислого газа из тканей. При участии эритроцитов углекислый газ, образующийся в процессе жизнедеятельности клеток, превращается в углекислые соли, которые постоянно циркулируют в крови. В капиллярах легких эти соли, опять же при обязательном участии эритроцитов, распадаются с образованием углекислого газа и воды. Углекислый газ и часть воды тут же удаляются из организма через дыхательные пути.
Эритроциты поддерживают относительное постоянство газового состава крови. При нарушении их функции во внутренней среде организма резко повышается содержание углекислого газа и развивается кислородная недостаточность, что губительно сказывается на деятельности всего организма.
Гемоглобин
В составе эритроцитов содержится белковое вещество гемоглобин, придающее крови красный цвет. Гемоглобин состоит из белковой части - глобина - и небелкового вещества - гема, содержащего двухвалентное железо. В капиллярах легких гемоглобин соединяется с кислородом, образуя оксигемоглобин .
В капиллярах тканей оксигемоглобин легко распадается с освобождением кислорода и гемоглобина. Этому способствует высокое содержание в тканях углекислого газа.
Оксигемоглобин имеет ярко-красный цвет, а гемоглобин - темно-красный. Этим объясняется различие в окраске венозной и артериальной крови.
Оксигемоглобин обладает свойствами слабой кислоты, что имеет важное значение в поддержании постоянства реакции крови (рН).
Гемоглобин способен образовывать соединение и с углекислым газом. Этот процесс происходит в капиллярах тканей. В капиллярах легких, где содержание углекислого газа значительно меньше, чем в капиллярах тканей, соединение гемоглобина с углекислым газом распадается. Таким образом, гемоглобин переносит не только кислород от легких к тканям. Он участвует и в переносе углекислого газа.
Наиболее прочно гемоглобин соединяется с угарным газом (СО). При содержании в воздухе 0,1% угарного газа больше половины гемоглобина крови связывается с окисью углерода, в связи с чем клетки и ткани не обеспечиваются необходимым количеством кислорода. В результате кислородного голодания появляются мышечная слабость, судороги, происходит потеря сознания и может наступить смерть.
Первая помощь при отравлении угарным газом - обеспечить приток чистого воздуха, напоить пострадавшего крепким чаем, а дальше необходимо медицинское вмешательство.
В 100 мл крови человека содержится в среднем около 16 г гемоглобина.
Определение количества гемоглобина производится колориметрическим способом, основанным на следующем принципе: если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотноситься как их объемы. Зная количество вещества в стандартном растворе, можно вычислить его содержание в исследуемом растворе. Прибор для определения количества гемоглобина в крови называют гемометром.
Гемометр (рис. 7) представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из стекла молочного цвета. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние пробирки сверху запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина (соединение гемоглобина с соляной кислотой). Средняя пробирка градуирована и открыта сверху. Она предназначена для исследуемой крови. К прибору приложены пипетка на 20 мм 3 и тонкая стеклянная палочка. Раствор, взятый для стандарта, содержит в 100 мл 16,7 г гемоглобина. Такое содержание гемоглобина считается высшим пределом нормы и принимается за 100%. Для проведения исследования гемоглобин испытуемой крови нужно перевести в солянокислый гематин. Это вещество коричневого цвета, а стандартный раствор его имеет окраску крепкого чая.
Опыт 7
В среднюю пробирку гемометра налейте 0,1-нормального раствора соляной кислоты до метки 10. В специальную пипетку, прилагаемую к гемометру, наберите 20 мм 3 крови; обтерев кончик пипетки ваткой (уровень крови в ней при этом не должен меняться), осторожно выдуйте кровь на дно пробирки с соляной кислотой. Не вынимая из пробирки пипетку, несколько раз сполосните ее соляной кислотой. Наконец, прикоснитесь пипеткой к стенке пробирки и тщательно выдуйте ее содержимое. Раствор оставьте на 5-10 мин, перемешивая его стеклянной палочкой. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин.
Затем в среднюю пробирку по каплям приливайте пипеткой дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаковым с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивайте палочкой). Особенно осторожно добавляйте последние капли.
Цифра, стоящая на уровне поверхности раствора в средней пробирке, покажет содержание гемоглобина в исследуемой крови в процентах по отношению к норме, условно принятой за 100 %.
Реакция оседания эритроцитов (РОЭ)
Если кровь предохранить от свертывания и оставить на несколько часов в капиллярных трубочках, то эритроциты, находящиеся в крови, в силу тяжести начинают оседать. Они оседают с определенной скоростью. У женщин нормальная скорость оседания эритроцитов 7-12 мм в 1ч, а у мужчин - 3- 9 мм в 1 ч.
Определение скорости оседания эритроцитов имеет важное диагностическое значение в медицине. При туберкулезе, различных воспалительных процессах в организме скорость оседания эритроцитов повышается.
Реакцию оседания эритроцитов (РОЭ) определяют с помощью прибора Панченкова (рис. 8).
Прибор представляет собой штатив, в котором укреплены в вертикальном положении капиллярные трубочки. На капиллярах нанесены деления в миллиметрах. Кроме того, на каждом капилляре имеются еще три метки: метка К (кровь), метка Р (реактив) и метка О, которая стоит на одном уровне с меткой К.
Форма и количество эритроцитов. У человека и многих млекопитающих животных представляют собой безъядерные клетки двояковогнутой формы.Они эластичны, что помогает проходить им по узким капиллярам. Диаметр эритроцита человека 7-8 мкм, а толщина 2-2,5 мкм. Отсутствие ядра и форма двояковогнутой линзы (поверхность двояковогнутой линзы в 1,6 раза больше поверхности шара) увеличивают поверхность эритроцитов, а также обеспечивают быструю и равномерную диффузию кислорода внутрь эритроцита.
В крови человека и высших животных молодые содержат ядра. В процессе созревания эритроцитов ядра исчезают.
Рис. 45. Счетная камера Горяева:
1 - вид сверху; 2 - вид сбоку; 3 - сетка Горяева; 4 - смеситель
Общая поверхность всех эритроцитов человека более 3000 м 2 , что в 1500 раз превышает поверхность его тела.
Общее количество эритроцитов, находящихся в крови человека, огромно. Оно примерно в 10 тыс. раз больше населения нашей планеты. Если выстроить все человека в один ряд, получилась бы цепочка длиной около 150 000 км, если же положить эритроциты один на другой, образовалась бы колонна высотой, превосходящей длину экватора земного шара (50000 -60 000 км).
В 1 мм крови содержится от 4 до 5 млн. эритроцитов (у женщин- 4,0-4,5 млн., у мужчин - 4,5-5,0 млн.). Количество эритроцитов не строго постоянно. Оно может значительно увеличиваться при недостатке кислорода на больших высотах, при мышечной работе. У людей, живущих в высокогорных районах, эритроцитов примерно на 30% больше, чем у жителей морского побережья. При переезде из низменных районов в высокогорные количество эритроцитов в крови увеличивается. Когда же потребность в кислороде уменьшается, количество эритроцитов в крови снижается.
Таблица 8
Возрастные изменения количества эритроцитов
| Возраст | Количество эритроцитов в 1 мм 3 кроси | ||
| среднее | колебания | ||
| При рождении | 5 250 000 | 4 500 000-6 000 000 | |
| 1-й день жизни | 6 000 000 | 5 000 000-7 500 000 | |
| 1-й месяц жизни | 4 700 000 | 3 500 000-5 600 000 | |
| 6-й месяц жизни | 4 100 000 | 3 500 000-5 000 000 | |
| 2-4 года | 4 600 000 | 4 000 000-5 200 000 | |
| 10-15 лет | 4 800 000 | 4 200 000-5 300 000 | |
| Взрослый | 5 000 000 | 4 000 000-5 500 000 | |
Подсчет эритроцитов производится при помощи специальных счетных камер (рис. 45).
Для подсчета форменных элементов взятую из пальца разбавляют в специальных смесителях, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для счета. Для разбавления крови при подсчете эритроцитов применяют гипертонический (3%-ный) раствор NaCl, в котором эритроциты сморщиваются.
Смеситель (меланжер) состоит из градуированной капиллярной трубочки с яйцевидным расширением (ампулой). В ампулу помещена стеклянная бусинка для лучшего размешивания крови (рис. 45, 4). Имеются смесители для подсчета красных и белых кровяных телец. В смесителях для эритроцитов бусинка внутри ампулы окрашена в красный цвет, а для лейкоцитов - в белый. На капилляре смесителей имеются метки 0,5 и 1,0; они обозначают половину или целый объем капилляра. Выше яйцевидного расширения метка 101 в смесителе для эритроцитов означает, что полость расширения имеет объем в 100 раз больший, чем объем полости капилляра. На смесителе для лейкоцитов имеется метка 11, свидетельствующая о том, что полость расширения в 10 раз больше полного объема капилляра. Когда в смеситель для эритроцитов набирают до метки 1,0, а затем разбавляют ее 3-процентным раствором NaCl, доводя общий объем до метки 101, будет разведена в 100 раз. При разведении в 200 раз следует набрать кровь в капилляре смесителя до метки 0,5 и добавить разбавляющей жидкости до метки 101.
Перед употреблением смеситель должен быть тщательно вымыт, высушен продуванием воздуха с помощью водоструйного насоса или резиновой груши. Достаточно ли просушен смеситель, определяют по передвижению бусинки в ампуле: прилипание бусинки к стенкам свидетельствует о наличии влаги.
Счетная камера представляет собой толстое предметное , на верхней поверхности которого имеются три поперечные площадки, разделенные между собой углублениями (рис. 45,1,2). Средняя площадка ниже крайних на 0,1 мм, и при наложении на боковые площадки покровного стекла над сеткой средней площадки образуется камера глубиной 0,1 мм. Камера Горяева имеет на средней площадке поперечный желобок. По обе стороны от этого желобка находится квадратная сетка, нарезанная специальной делительной машиной. Сетка может иметь разный рисунок в зависимости от конструкции камеры. В сетке камеры Горяева имеется 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 маленьких квадратиков каждый. Размеры маленьких квадратиков в камере любой конструкции одинаковы. Сторона малого квадрата равна 1 / 20 мм, следовательно, его площадь (1/20) (1/20) = 1/400 мм 2 . Если учесть, что высота камеры (расстояние от средней площадки до покровного стекла) равна 1/10мм, объем над малым квадратом равен (1/400) (1/10) = 1/4000 мм 3 .
Налейте в чашечку раствор для разбавления крови (3-процентный раствор NaCl). Проколите иглой палец и погрузите в выступившую кровь кончик смесителя. Наконечник смесителя возьмите в рот и насосите кровь до метки 0,5. Надо следить, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Для этого кончик капилляра должен быть погружен в каплю крови до конца насасывания. Нельзя прижимать смеситель к пальцу, чтобы не закупорить отверстие смесителя. Нужно стараться, чтобы кров не поднималась выше указанной метки на смесителе, но если это случилось, то можно осторожно опустить кончик капилляра на вату или фильтровальную бумагу, и уровень крови опустится. Разумеется, ошибка при подсчете увеличится. Затем быстро погрузите кончик капилляра в разбавляющую жидкость (3-процентиый раствор NaCl). Не выпуская кровь из смесителя, насосите в него ртом разбавляющий раствор до метки 101. Кровь теперь будет разведена в 200 раз. Закончив набор жидкости, смеситель переведите в горизонтальное положение, снимите резиновую трубку, закройте капилляр с обоих концов большим и указательным пальцами и тщательно перемешайте жидкость в расширении смесителя. Теперь смеситель в горизонтальном положении положите на стол.
Плотно притрите покровное к крайним площадкам счетной камеры, так чтобы при опрокидывании камеры не падало. Из смесителя выпустите 2-3 капли жидкости на вату или фильтровальную бумагу, а следующую каплю с кончика.капилляра выпустите под покровное стекло в счетную камеру. Смесь в силу капиллярности должна ее равномерно заполнить, а положение покровного стекла не должно измениться. Если стекло «всплывает», то камеру тщательно протрите и процедуру заполнения повторите. Заполненную камеру поместите под микроскоп.
При малом увеличении (окуляр 15х) подсчитайте эритроциты в 80 маленьких квадратиках, что соответствует пяти большим часто разграфленным квадратам; 5 больших квадратов выбирайте по диагонали через всю счетную камеру. Это делается для того, чтобы уменьшить ошибку, связанную с неравномерностью заполнения камеры.
Чтобы облегчить подсчет эритроцитов, на «листе бумаги нарисуйте 5больших квадратов, каждый из них разделите на 16 маленьких квадратиков. Подсчитав под микроскопом число эритроцитов в каждом маленьком квадратике, впишите эту величину в квадратики на бумаге.
Для того чтобы не ошибиться в подсчете и дважды не подсчитывать эритроциты, лежащие на границах между малыш квадратиками, пользуйтесь таким правилом: относящимися к данному квадрату считаются эритроциты, лежащие внутри квадрата и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе квадрата, не считаются.
Подсчитав таким образом количество эритроцитов в пяти больших квадратах (80 маленький квадратиках), найдите среднее арифметическое из числа эритроцитов в одном маленьком квадратике.
Исходным для дальнейших расчетов принимают объем жидкости над од ним малым квадратиком. Поскольку он равен 1/4000 мм 3 , то количество эритро цитов в 1 мм 3 крови можно подсчитать, умножив среднее количество эритроцитов в малом квадратике на 4000 и на величину разведения крови. Для подсчете удобно пользоваться следующей формулой:
где Э - число эритроцитов в 1 мм 3 ; n - число эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратиках; 200 - разведение крови.
Закончив подсчет эритроцитов, надо вымыть счетную камеру и вытереть насухо чистой марлей.
Старение и смерть эритроцитов
Средняя продолжительность жизни эритроцитов 100-120 сут. По мере старения, к концу своего жизненного цикла, проходя через мелкие кровеносные сосуды печени или селезенки, эритроциты приклеиваются к клеткам, выстилающим внутреннюю поверхность сосудов. Это ретикуло-эндотелиальные клетки. Они способны к фагоцитозу. Захватывают они не только состарившиеся эритроциты, но и чужеродные частицы. У здорового человека селезенка разрушает лишь старые или случайно поврежденные эритроциты. При старении или повреждении эритроциты теряют свою эластичность и поэтому уже не могут преодолеть сопротивление капиллярных сосудов, задерживаются в селезенке и их поглощают ретикуло-эндотелиальные клетки.
После распада эритроцитов из гемоглобина в печени образуется пигмент билирубин. Попадая в составе желчи в кишечник, билирубин восстанавливается в пигменты стеркобилин, окрашивающий каловые массы в коричневый цвет, и уробилин, придающий моче характерный цвет. По количеству этих пигментов в кале и моче можно- вычислить суточный распад гемоглобина в организме и судить о величине разрушения эритроцитов.
Освободившееся после распада гемоглобина, откладывается в печени и селезенке как резерв и по мере надобности отсюда поступает в костный мозг, где вновь включается в молекулы гемоглобина.
У здорового человека в сутки при распаде эритроцитов освобождается 20-30 мг железа, что составляет суточную потребность взрослого человека в железе.
Значение эритроцитов. Основная функция эритроцитов заключается в переносе кислорода от легких ко всем клеткам тела. Находящийся в эритроцитах легко соединяется с кислородом и легко отдает его в определенных условиях.
Велика роль эритроцитов и в удалении углекислого газа из тканей. С их участием углекислый газ, образующийся при жизнедеятельности клеток, превращается в углекислые соли, которые постоянно циркулируют в крови. В капиллярах легких эти соли, опять же при обязательном участии эритроцитов, распадаются с образованием углекислого газа и воды. Углекислый газ и часть воды тут же удаляются из организма через дыхательные пути.
Эритроциты поддерживают относительное постоянство газового состава крови. При нарушении их функции во внутренней среде организма резко повышается содержание углекислого газа и развивается кислородная недостаточность, что губительно сказывается на деятельности всего организма.
Гемоглобин
В составе эритроцитов находится белковое вещество - , придающее крови красный цвет. Эритроциты более чем на 90% состоят из гемоглобина. состоит из белковой части - глобина и небелкового - (простетическая группа), содержащего двухвалентное . В капиллярах легких гемоглобин соединяется с кислородом, образуя оксигемоглобин. Своей способности соединяться с кислородом гемоглобин обязан гему, а точнее, присутствию в его составе двухвалентного железа.
В капиллярах тканей оксигемоглобин легко распадается с освобождением кислорода и гемоглобина. Этому способствует высокое содержание в тканях углекислого газа.
Оксигемоглобин имеет ярко-красный цвет, а гемоглобин темно-красный. Этим объясняется различие в окраске венозной и артериальной крови.
Оксигемоглобин обладает свойствами слабой кислоты, что имеет важное значение в поддержании постоянства реакции крови (рН).
Гемоглобин способен образовывать соединение и с углекислым газом. Этот процесс происходит в капиллярах тканей. В капиллярах легких, где содержание углекислого газа значительно меньше, чем в капиллярах тканей, соединение гемоглобина с углекислым газом распадается. Таким образом, гемоглобин переносит не только от легких к тканям. Он участвует и в переносе углекислого газа.
Наиболее прочно гемоглобин соединяется с угарным газом (СО). При содержании в воздухе 0,1% угарного газа больше половины гемоглобина крови соединяется с окисью углерода, в связи с чем клетки и ткани не обеспечиваются необходимым количеством кислорода. В результате кислородного голодания появляется мышечная слабость, потеря сознания, судороги и может наступить смерть. Первая помощь при отравлении угарным газом - обеспечить приток чистого воздуха, напоить пострадавшего крепким чаем, а дальше необходима медицинская помощь.
В 100 мл крови взрослого человека содержится 13-16 г гемоглобина. Как же это понимать? Ведь часто говорят, что содержание гемоглобина в крови составляет 65-80%. Но дело в том, что в медицинской практике за 100 принимают содержание гемоглобина, равное 16,7 г в 100 см 3 крови. Обычно в крови взрослого человека содержится не 100% гемоглобина, а несколько меньше - 60-80%. Следовательно, если в анализе крови записано «80 единиц гемоглобина», то это означает, что в 100 мл крови содержится 80% от 16,7 г, т. е. около 13,4 г гемоглобина.
Высокая величина гемоглобина (свыше 100%) и большое количество эритроцитов (около 6 000 000) наблюдаются у новорожденных, к 5-6-му дню его жизни эти показатели снижаются, что связано с кроветворной функцией костного мозга. Затем к 3-4 годам количество гемоглобина и эритроцитов несколько увеличивается. В 6-7 лет в связи с бурным ростом отмечается замедление в нарастании числа эритроцитов и содержания гемо глобина. С 8-летнего возраста отмечается нарастание числа эритроцитов и количества гемоглобина.
Определение количества гемоглобина производят колориметрическим способом, основанным на следующем принципе. Если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотноситься как их объемы. Зная количество в стандартном растворе, можно вычислить его содержание в исследуемом растворе. Прибор для определения количества гемоглобина в крови называют гемометром.
Рис. 46.
Гемометр (рис. 46) представляет собой штатив; задняя стенка в нем из стекла молочного цвета. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние сверху запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина (соединение гемоглобина с соляной кислотой). Средняя пробирка градуирована и открыта сверху. Она предназначена для исследуемой крови. К прибору приложены пипетка на 20 мм 3 и тонкая стеклянная палочка. Раст вор, взятый для стандарта, содержит в 100 см 3 крови 16,7 г гемоглобина. Такое содержание гемоглобина считается высшим пределом нормы и принимается за 100%, или единиц гемометра. Для проведения исследования переведите и гемоглобин испытуемой крови в солянокислый гематин. Это вещество коричневого цвета, а стандартный раствор его имеет окраску крепкого чая.
В среднюю пробирку гемометра налейте 0,1-нормального раствора соляной кислоты до метки 10. Специальной пипеткой, прилагаемой к гемометру, возьмите 20 мм 3 крови; обтерев кончик пипетки ваткой (уровень крови в ней при этом не должен меняться), осторожно выдувайте кровь на дно пробирки с соляной кислотой. Не вынимая из пробирки пипетку, несколько раз сполосните ее соляной кислотой. Наконец, прикоснитесь пипеткой к стенке пробирки и тщательно выдуйте ее содержимое. Раствор оставьте на 5-10 мин, перемешивая его стеклянной палочкой. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем в среднюю пробирку по каплям пипеткой приливайте дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаковым с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивайте палочкой). Особенно осторожно добавляйте последние капли.
Цифра, стоящая на уровне поверхности раствора в средней пробирке, покажет содержание гемоглобина в исследуемой крови в процентах по отношению к норме, условно принятой за 100%.
Реакция оседания эритроцитов (РОЭ)
Если кровь предохранить от свертывания и оставить на несколько часов в капиллярных трубочках, то эритроциты, находящиеся в крови, в силу тяжести начинают оседать. Они оседают с определенной скоростью. У женщин нормальная скорость оседания эритроцитов 7-12 мм в 1 ч, а у мужчин 3-9 мм в 1 ч.
Определение скорости оседания эритроцитов имеет важное диагностическое значение в медицине. При туберкулезе, различных воспалительных процессах в организме скорость оседания эритроцитов повышается.
Определяют скорость оседания эритроцитов (РОЭ) с помощью прибора Панченкова (рис. 47).
Рис. 47.
Прибор представляет собой штатив, в котором укреплены в вертикальном положении капиллярные трубочки. Капилляры имеют деления в миллиметрах. Кроме того, на капилляре имеются еще три метки: метка К (кровь), метка Р (реактив) и метка О, которая стоит на одном уровне с меткой К. Д ля предохранения крови от свертывания возьмите 5-процентный раствор лимоннокислого натрия (цитрат). Этим раствором вначале промойте капилляр, а затем наберите его в капилляр до метки Р (реактив). Выдуйте противосвертывающий раствор из капилляра на часовое стекло.
Проколите кожу пальца иглой и в тот же капилляр наберите кровь до метки К
(кровь). Кровь из капилляра выдуйте на часовое стекло, смешивая ее с имеющимся там раствором лимоннокислого натрия. При заполнении капилляра кровью важно, чтобы в него не лопали пузырьки воздуха. Для этого Прокол пальца сделайте более глубокий, чем обычно, и, погрузив кончик капилляра в основание капли крови, переведите капилляр в горизонтальное положение. Теперь кровь по закону капиллярности сама заполнит капилляр. Полученную таким образом смесь крови с лимоннокислым натрием наберите в капилляр до метки
Роль крови в дыхании Методы исследования газов крови. Впервые И. М. Сеченову в 1858 г. удалось при помощи сконструированного им... ЭРИТРОЦИТЫ Эритроциты многих млекопитающих и человека представляют собой круглые двояковогнутые безъядерные клетки. Диаметр эритроцитов человека равен 7 — 8μ, а толщина...
Эритроциты . Эритроцитами называются безъядерные красные кровяные клетки. Они имеют двояковогнутую форму, которая увеличивает их поверхность более чем в 1,5 раза. Количество эритроцитов в 1 мм3 крови равно у мужчин 5- 5,5 млн., а у женщин - 4-5,5 млн. У здоровых новорожденных в первый день жизни оно доходит до 6 млн., а затем снижается до нормы взрослого человека. У младших школьников оно равно 5- 6 млн. Наибольшие колебания количества эритроцитов наблюдаются в период полового созревания.
Рис. 45. Кровь человека:
/ - эритроциты, 2 - нейтрофильный лейкоцит, 3 - эозинофильный лейкоцит, 4 - лимфоцит, 5 - кровяные пластинки
Мышечная работа вызывает у детей увеличение или уменьшение количества эритроцитов или не изменяет его. В 13-15 лет количество эритроцитов увеличивается при мышечной работе значительно реже и меньше, чем в 16-18 и 19-23.
В 16-18 лет при длительной мышечной работе иногда наблюдается незначительное снижение содержания эритроцитов и гемоглобина в результате разрушения эритроцитов. Восстановление количества эритроцитов до исходного уровня после мышечной работы у юношей 17-18 лет происходит позднее, чем у взрослых.
В эритроцитах взрослого человека гемоглобин составляет около 32% веса, в среднем 14% веса цельной крови (14 г на 100 г крови). Это количество гемоглобина приравнивается к 100%.
Рис. 46. Возрастные изменения содержания гемоглобина в крови: 1 - мальчики и девочки, 2 - мужчины, 3 - женщины
Относительное содержание гемоглобина с возрастом увеличивается и к 14-15 годам доходит до нормы взрослого. Оно равно (в г на кг веса тела): в 7-9 лет - 7,5; 10-11-7,4; 12-13 - 8,4 и 14-15-10,4.
Гемоглобин обладает видовой специфичностью. У новорожденного он поглощает больше кислорода, чем у взрослого. С 2 лет эта способность гемоглобина максимальна, а с 3 лет гемоглобин поглощает кислород, как и у взрослых.
С возрастом увеличивается количество кислорода в артериальной и венозной крови. У детей 5-6 лет оно равняется (в см3 в 1 мин) в артериальной крови 400, в венозной - 260, у подростков 14-15 лет соответственно 660 и 435, взрослых 800 и 540. Содержание кислорода в артериальной крови (в см3 на 1 кг веса в 1 мин) равно: у детей 5-6 лет - 20, подростков 14-15 лет- 13 и у взрослых-11. Относительно большое количество кислорода, переносимое артериальной кровью, у дошкольников объясняется относительно большим количеством крови и кровотоком, значительно превышающим кровоток взрослых.
Количество кислорода, максимально поглощаемого кровью, можно определить, учитывая, что 1 г гемоглобина поглощает при ГС и давлении 760 мм рт. ст. 1,34 см3 кислорода. Кровь взрослого человека содержит примерно 600 г гемоглобина. Следовательно, она может поглотить 800 см3 кислорода. Соединение гемоглобина с кислородом (оксигемоглобин) легко диссоциирует в тканях на гемоглобин и кислород.
Способность гемоглобина соединяться с окисью углерода в 250 раз больше, чем его способность соединяться с кислородом, а диссоциирует соединение гемоглобина с окисью углерода - карбоксигемоглобин в 3600 раз медленнее. Поэтому образование карбоксигемоглобина при угаре опасно для жизни.
Кроме переноса кислорода, эритроциты участвуют в ферментативных процессах, в сохранении активной реакции крови и в обмене воды и солей. За сутки через эритроциты проходит от 300 до 2000 дм3 воды.
При отстаивании цельной крови, к которой прибавлены противосвертывающие вещества, эритроциты постепенно оседают. Скорость реакции оседания эритроцитов - РОЭ, у мужчин 3-9 мм, а у женщин - 7-12 мм в час. РОЭ зависит от количества белков в плазме крови и от отношения глобулинов к альбуминам. Так как у новорожденного в плазме около 6% белков и отношение количества глобулинов к альбуминам тоже меньше, чем у взрослых, то РОЭ у них около 2 мм, у грудных детей - 4-8 мм, а у более старших детей - 4-8 мм в час.
После учебной нагрузки у большинства детей 7-11 лет нормальная РОЭ (до 12 мм в час) и замедленная РОЭ ускоряются, а ускоренная РОЭ замедляется.
Эритроциты сохраняются только в физиологических растворах, в которых концентрация минеральных веществ, особенно поваренной соли, такая же, как и в плазме крови. Эритроциты разрушаются в растворах, где содержание поваренной соли меньше или больше, чем в плазме крови, при действии на них ядов, ультрафиолетовых лучей, ионизирующего облучения, лучей Рентгена, эманации радия. Разрушение эритроцитов называется гемолизом.
Способность эритроцитов противостоять гемолизу называется резистентностью. С возрастом резистентность эритроцитов значительно падает. Она наибольшая у новорожденных и к 10 годам уменьшается примерно в 1,5 раза.
Эритроциты в здоровом организме постоянно разрушаются при участии особых веществ - гемолизинов, вырабатываемых в печени. Эритроциты живут у новорожденного 14, а у взрослого не больше 100-150 дней (в среднем 30-40 дней). У человека гемолиз происходит в селезенке и печени. Вместо разрушенных в кровотворных органах образуются новые эритроциты и, следовательно, количество эритроцитов поддерживается на относительно постоянном уровне.